文章目录

1 材料与方法

1.1 细胞

1.2 主要试剂及仪器

1.3 MDCK-siat7e细胞的传代培养

1.4 不同代次MDCK-siat7e细胞的生长状况观察及生长曲线绘制

1.5 不同代次MDCK-siat7e细胞各生长指标及生化指标的比较

1.6 45代MDCK-siat7e细胞的成瘤性及致瘤性检测

1.7 不同代次MDCK-siat7e细胞中siat7e基因表达量的比较

1.8 细胞计数及细胞活率检测

1.9 葡萄糖、乳酸、氨含量检测

2 结果

2.1 不同代次MDCK-siat7e细胞的形态观察

2.2 不同代次MDCK-siat7e细胞生长曲线的比较

2.3 不同代次MDCK-siat7e细胞各生长指标及生化指标的比较

2.4 45代MDCK-siat7e细胞的成瘤性和致瘤性

2.5 不同代次MDCK-siat7e细胞中siat7e基因表达量

3 讨论

文章摘要:目的研究连续传代的犬肾上皮（Madin-Darby canine kidney,MDCK）细胞MDCK-siat7e的传代稳定性。方法复苏工作细胞库,连续传45代,比较不同代次（0、7、17、28、45代）MDCK-siat7e细胞生长4 d的形态、0～9 d的生长曲线及比生长速率（μ）、葡萄糖比消耗率[Qi（Gluc）_{24 h}]、乳酸比生成率[Qi（Lac）_{24 h}]、氨比生成率[Qi（NH4⁺）_{24 h}]。采用q RT-PCR法检测不同代次MDCK-siat7e细胞中siat7e基因的表达量。采用裸鼠体内接种法检测连续传代至第45代的MDCK-siat7e细胞的成瘤性;采用细胞裂解物裸鼠体内接种法和细胞DNA裸鼠体内接种法检测连续传代至第45代的MDCK-siat7e细胞的致瘤性。结果 5个不同代次的MDCK-siat7e细胞在培养4 d时均呈圆形,细胞边缘清晰,均匀分散于培养液中,无聚团现象,呈悬浮生长状态,生长状态良好。不同代次MDCK-siat7e细胞的μ、Qi（Gluc）_{24 h}、Qi（Lac）_{24 h}及Qi（NH4⁺）_{24 h}差异均无统计学意义（P>0.05）。不同代次MDCK-siat7e细胞siat7e基因表达量差异均无统计学意义（P>0.05）。连续传代至第45代的MDCK-siat7e细胞无明显的致瘤性。结论 MDCK-siat7e细胞连续传代至45代时,细胞形态基本保持一致,目的基因稳定,无致瘤性。

文章关键词:

论文DOI:10.13200/j.cnki.cjb.003420

论文分类号:Q813.11