文章目录

1 材料与方法

1.1 样品

1.2 细胞

1.3 试剂材料

1.4 主要仪器

1.5 生物学活性测定

1.6 纯度分析

    1.6.1 CE-SDS

    1.6.2 SEC-HPLC

1.7 电荷异质性

1.8 鉴别试验

1.9 寡糖含量分析

2 结果

2.1 生物学活性

2.2 纯度

    2.2.1 还原/非还原型CE-SDS

    2.2.2 SEC-HPLC

2.3 成像毛细管等电聚焦电泳（iCIEF)

2.4 肽图

2.5糖基化分析

3 讨论

文章摘要:目的:研究并建立针对抗白细胞分化抗原19（Cluster of Differentiation 19,CD19）单抗的关键质量属性质控方法。方法:运用肽图对抗CD19的单抗进行鉴别;采用还原/非还原十二烷基磺酸钠毛细管电泳（Capillary Electrophoresis-sodium Dodecyl sulfonate,CE-SDS）和分子排阻色谱（Size ExclusionHigh Performance Liquidchromatography,SEC-HPLC）进行单抗纯度的控制;运用成像毛细管等电聚焦电泳（Imaging Capillary Isoelectricfocusing Electrophoresis,iCIEF）测定电荷异质性;运用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）分析抗CD19单抗的糖基化,采用基于报告基因的抗体依赖的细胞介导的细胞毒效应（Antibody-Dependent Cell-mediated Cytotoxicity,ADCC）测定生物学活性。其他各项指标均应符合现行版《中华人民共和国药典》以及其他相关要求。结果:肽图检测抗CD19单抗具有相应的特征图谱,能够用于鉴别;还原CE-SDS的轻链与重链峰面积之和百分比为（98.77±0.05）%;非还原CE-SDS主峰峰面积百分比为（96.19±0.05）%,片段百分比为（3.81±0.05）%;SEC-HPLC单体的峰面积百分比为（99.42±0.001）%,聚合物峰面积百分比为（0.54±0.001）%;iCIEF分析的主要亚型的峰面积百分比为（66.41±0.38）%,酸性亚型的峰面积百分比为（13.69±0.16）%,碱性亚型的峰面积百分比为（19.90±0.46）%;在糖型分析中,占比最高的三个糖型分别为G0、G0-GN和M5,G0的含量为（64.64±0.61）%,G0-GN的含量为（9.75±0.42）%,M5含量为（6.22±0.35）%,生物学活性的半数最大效应浓度（Concentration for 50%of Maximal Effect,EC50）值为（10.09±1.40）ng·mL^-1。结论:针对抗CD19单抗的关键质量属性,研究并建立了相应的质量控制方法,以确保其安全、有效和质量可控,为该类单抗产品的质量控制方法和策略提供参考依据。

文章关键词:

论文DOI:10.16153/j.1002-7777.2021.09.010

论文分类号:R95