文章目录

1 材料与方法

1.1 细胞及毒株

1.2 主要试剂及仪器

1.3 病毒液制备

1.4 核酸酶处理条件的优化

1.5 Capto Core 700层析条件的优化

    1.5.1 上样缓冲液盐离子浓度

    1.5.2 线性流速的优化

1.6 Capto Q线性流速的优化

1.7 病毒纯化

1.8 总蛋白含量检测

1.9宿主细胞残留DNA检测

1.10宿主细胞残留蛋白检测

1.11血凝素含量检测

1.12统计学分析

2 结果

2.1 核酸酶处理条件

2.2 复合介质层析条件

    2.2.1 上样缓冲液盐离子浓度

    2.2.2 线性流速

2.3 Capto Q线性流速

2.4 纯化病毒的检测结果

3 讨论

文章摘要:目的建立无血清悬浮MDCK细胞培养流感病毒的下游纯化工艺。方法采用40 L反应器,收获无血清悬浮MDCK细胞培养的流感病毒,经澄清浓缩后,添加不同终浓度（1、10、30、50 U/mL）的Benzonase^?核酸酶,置37℃酶解不同时间（2、4、6、8 h）,优化核酸酶去除细胞残留DNA的条件。采用两步层析法,探讨不同线性流速（60、150、300 cm/h）和上样缓冲液盐离子浓度（150、500、1 000 mmol/L）对复合介质纯化效果的影响;探讨不同线性流速（60、150、300 cm/h）对离子层析介质纯化效果的影响。根据确定的参数进行3批次纯化工艺样品的检测。结果病毒浓缩液经10 U/mL Benzonase^?核酸酶37℃酶解6 h后,DNA去除率即可达99%以上。确定复合介质的流速为60 cm/h,上样缓冲液组成为150 mmol/L NaCl+50 mmol/L Tris,pH 7.4,确定离子交换介质流速为150 cm/h。3批纯化工艺样品去除了99.94%的宿主细胞残留蛋白和99.99%的残留DNA,残留DNA达欧盟标准,不高于10 ng/剂。结论初步建立了无血清悬浮MDCK细胞流感疫苗的下游纯化工艺。

文章关键词:

论文DOI:10.13200/j.cnki.cjb.003428

论文分类号:Q813.11;R392-33