文章目录

1 材料与方法

1.1 细胞、病毒、菌株及载体

1.2 主要试剂及仪器

1.3 实验动物

1.4 引物设计及合成

1.5 目的基因的扩增

1.6 重组表达质粒的构建

1.7 目的蛋白的表达

1.8 目的蛋白纯化

1.9 纯化蛋白的Western blot鉴定

1.1 0 动物分组及给药

1.11血清抗体效价的检测

1.12血清中和效价的检测

2 结果

2.1 目的片段扩增产物的鉴定

2.2 重组表达质粒的鉴定

2.3 表达产物的鉴定

2.4 纯化产物的鉴定

    2.4.1 SDS-PAGE分析

    2.4.2 Western blot分析

2.5 免疫原性分析

3 讨论

文章摘要:目的原核表达截短型水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus,VZV）糖蛋白E（glycoprotein E,gE）,并评价其免疫原性。方法通过GenBank获取VZV gE的第25～537位氨基酸（gE25-537）相应的核酸序列,经密码子优化,合成质粒pUC-VZV-gE25-537-His;以其为模板扩增目的片段,克隆至载体pET-21b,构建重组表达质粒pET-21b-VZV-gE25-537-His,转化感受态E. coli BL21（DE3）,经IPTG诱导表达,包涵体经Urea溶解后,进行镍离子层析柱纯化。将纯化蛋白与弗氏佐剂混合,经皮下多点免疫小鼠,共免疫3次,末次免疫2周,经尾部静脉采血,分离血清,检测血清效价和中和效价。结果重组表达质粒pET-21b-VZV-gE25-537-His经双酶切及测序鉴定证明构建正确。目的蛋白相对分子质量约62 000,主要以包涵体形式表达,纯化后纯度达85%,且可与鼠抗gE单克隆抗体发生特异性结合。免疫3次后,小鼠血清效价可达1∶54 954,中和效价为1∶21.75。结论原核表达了VZV gE,该蛋白具有良好的免疫原性,有望成为制备带状疱疹疫苗的候选抗原。

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论文DOI:10.13200/j.cnki.cjb.003463

论文分类号:R392