文章目录

1 材料与方法

1.1 材料

    1.1.1 病毒株与样品

    1.1.2 主要试剂

    1.1.3 主要仪器设备

1.2 方法

    1.2.1 引物和探针

    1.2.2 标准质粒制备

    1.2.3 标准曲线的建立

    1.2.4 特异性试验

    1.2.5 敏感性试验

    1.2.6 重复性试验

    1.2.7 临床样品检测

2 结 果

2.1 质粒标准品的构建

2.2 标准曲线的绘制

2.3 TaqMan荧光定量RT-PCR方法的特异性

2.4 TaqMan荧光定量RT-PCR方法的敏感性

2.5 TaqMan荧光定量RT-PCR方法的重复性

2.6 临床病料检测

3 讨 论

文章摘要:以新发生的兔出血症病毒2型（RHDV2）SC 2020/04株VP60基因序列为参考,设计出1对特异性引物和TaqMan探针,建立了一种快速、灵敏且特异的用于检测新型病毒的荧光定量RT-PCR检测方法。试验结果显示:本研究建立的方法,标准曲线线性关系良好,R²值达到0.999;其特异性较好,与兔出血症病毒1型（RHDV1）、仙台病毒（SV）和轮状病毒（RRV）病原均无交叉反应;灵敏性高,最低检出量为1μl 1×10拷贝;且重复性良好,批内和批间试验的变异系数平均值均小于2%。临床检测结果表明,利用该方法对108份临床病料进行检测,检出RHDV2阳性样品72份,检出率为66.7%,明显高于常规的RT-PCR方法（62.0%）。结果证明,新建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法适合于RHDV2感染的特异性诊断。

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