文章目录

1 材料与方法

1.1 主要试剂及仪器

1.2 样品配制

    1.2.1 对照品溶液

    1.2.2 氧化加速试验样品

    1.2.3 脱酰胺加速试验样品

1.3 rh GH-Fc相关蛋白结构解析

    1.3.1 样品处理

    1.3.2 质谱检测方法

1.4 方法优化

    1.4.1 梯度洗脱方法

    1.4.2 流动相

1.5 方法的验证

    1.5.1 系统适应性

    1.5.2 重复性

    1.5.3 专属性

    1.5.4 耐用性

    1.5.5 检测限及定量限

1.6 rh GH-Fc氧化产物及脱酰胺产物的检测

1.7 rh GH-Fc相关蛋白检测方法的初步应用

2 结果

2.1 rh GH-Fc相关蛋白结构

2.2 方法优化的结果

2.3 方法的验证结果

    2.3.1 系统适应性

    2.3.2 重复性

    2.3.3 专属性

    2.3.4 耐用性

    2.3.5 检测限及定量限

2.4 rh GH-Fc氧化产物及脱酰胺产物分析

2.5 rh GH-Fc相关蛋白检测方法的初步应用

3 讨论

文章摘要:目的建立长效生长激素（recombinant human growth hormone-Fc,rhGH-Fc）相关蛋白含量检测的反相高效液相色谱（RP-HPLC）法,并进行验证。方法通过质谱肽图法进行rhGH-Fc相关蛋白结构解析后建立相关蛋白含量检测的方法,优化梯度洗脱方法和流动相方案,并对该方法进行重复性、专属性、耐用性验证,确定检测限和定量限。用建立的方法检测rhGH-Fc氧化加速试验样品、脱酰胺加速试验样品及不同批次纯化液样品。结果建立的RP-HPLC法色谱柱为ZORBAX 300SB-C18（4.6 mm×250 mm,5-Micron）,柱温45℃,上样量40μg,流速0.7 mL/min,检测波长280 nm;流动相A为30%乙腈+0.1%三氟乙酸,流动相B为80%乙腈+0.1%三氟乙酸;梯度洗脱方法为0～10 min,10%B→50%B;10～50 min,50%B→90%B。rhGH-Fc的相关蛋白主要产生在4个氧化位点和2个脱酰胺位点处。建立的RP-HPLC检测方法重复性验证RSD为1.8%;蛋白缓冲液对检测结果无干扰;耐用性验证RSD为0.05%;在相同色谱柱条件下,不同设备、不同时间配制的流动相、不同柱温对检测结果无明显影响;方法检测限为0.01 mg/mL,定量限为0.025 mg/m L。结论成功建立了rhGH-Fc相关蛋白含量的RP-HPLC检测方法,该方法重复性、专属性、耐用性良好,可用于rhGH-Fc相关蛋白含量的检测。

文章关键词:

论文DOI:10.13200/j.cnki.cjb.003524

论文分类号:O657.72;R927.2