文章目录

1 材料与方法

1.1 病毒与细胞

1.2 试剂

1.3 引物设计与合成

1.4 质粒标准品的构建

1.5 一步法RT-PCR反应体系及条件的优化

    1.5.1 引物浓度优化

    1.5.2 退火温度优化

1.6 特异性试验

1.7 敏感性试验

1.8 重复性试验

1.9 临床样品的检测

2 结果与分析

2.1 质粒标准品的构建

2.2 一步法RT-PCR反应条件优化

    2.2.1 引物浓度优化

    2.2.2 退火温度优化

2.3 特异性试验

2.4 敏感性试验

2.5 重复性试验

2.6 临床样品检测

3 讨论

文章摘要:新型鹅星状病毒（goose astrovirus, GoAstV）感染引起的鹅痛风病,是近年严重危害我国养鹅业的传染病之一,给我国养鹅产业造成严重经济损失,快速准确诊断有助于更好地防控该病。为了建立一种鉴定新型GoAstV的一步法RT-PCR方法,根据新型GoAstV ORF2基因序列设计特异性引物,构建质粒标准品,并对引物用量和退火温度等反应体系和条件进行了优化。结果表明,该方法能特异性扩增新型GoAstV 512 bp基因片段,其他鹅常见病毒性病原扩增结果均为阴性,具有较高的特异性。敏感性试验结果提示,最小检测限量达4.54×10²拷贝/μL。此外,该方法重复性良好,应用所建立的方法对新型GoAstV临床样品进行检测,102份鹅泄殖腔拭子的阳性率为46.08%,24份痛风症状患病鹅内脏样本阳性率为91.70%。本研究建立的新型GoAstV一步法RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,且操作简便、经济、快速,可用于新型GoAstV的临床鉴别诊断和流行病学调查。

文章关键词:

论文DOI:10.15889/j.issn.1002-1302.2022.02.024

论文分类号:S858.33