文章目录

材料与方法

1 抗体与蛋白

2 试剂

3 仪器

4 参考品及疫苗样品

5 夹心ELISA方法的建立

    5.1 测定不同抗体对N蛋白的亲和能力及抗体效价

    5.2 比较不同抗体组合建立的夹心ELISA方法

    5.3 优化包被抗体、检测抗体浓度

    5.4 确定病毒裂解方式

    5.5 参考品及标准曲线的建立

        5.5.1 建立参考品

        5.5.2 建立标准曲线

6 方法验证

    6.1 线性及范围

    6.2 准确度、精密度、中间精密度测定

7 方法初步应用

8 统计学分析

结 果

1 测定抗体对N蛋白亲和能力及抗体效价

2 比较不同抗体组合建立夹心ELISA方法结果

3 优化包被抗体、检测抗体浓度

4 病毒裂解方式的选择

5 参考品与标准曲线建立

    5.1 标定参考品

    5.2 建立标准曲线

6 方法验证

    6.1 线性及范围

    6.2 精确度、准确度、中间精密度测定

7 初步应用

讨 论

文章摘要:目的:建立新型冠状病毒（SARS coronavirus 2,SARS-CoV-2）灭活疫苗N蛋白含量双抗体夹心ELISA检测方法,并对其进行验证及初步应用。方法:首先包被重组N蛋白,采用间接ELISA方法测定不同抗体对N蛋白的亲和能力。再选取高亲和力的抗体rN003作为包被抗体,rN002作为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA检测方法并确定病毒裂解方法。测定该方法的线性范围、准确度、精确度、中间精密度、特异性及灵敏度,并用该方法测定6批SARS-CoV-2灭活疫苗中N蛋白的含量。结果:N蛋白含量在0.018～0.75μg·mL^-1范围内该方法呈现良好的线性关系（R²>0.98）,回收率在80%～120%之间,CV<10%。6批样品N蛋白含量均占总蛋白的10%～20%,样品均一性较好。结论:本研究成功建立了SARS-CoV-2灭活疫苗N蛋白含量双抗体夹心ELISA检测方法,该方法具有良好的线性、准确度、精确度、中间精密度、特异性及灵敏度,能满足SARS-CoV-2灭活疫苗N蛋白含量的检测。

文章关键词:

论文分类号:R392-3